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分光光度計(jì)的使用方法

1．使用儀器前，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理。以及各個(gè)操作旋鈕之功能。在未接通電源前，應(yīng)該對(duì)儀器的安全性進(jìn)行檢查，電源線接線應(yīng)牢固。通地要良好，各個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再接通電源開(kāi)關(guān)。儀器在使用前先檢查一下，放大器暗盒的硅膠干燥筒（在儀器的左側(cè)），如受潮變色，應(yīng)更換干燥的藍(lán)色硅膠或者倒出原硅膠，烘干后再用。     2．將靈敏度旋鈕調(diào)置“1”檔（放大倍率zui小）。
    3．開(kāi)啟電源，指示燈亮，選擇開(kāi)關(guān)置于“T”，波長(zhǎng)調(diào)至測(cè)試用波長(zhǎng)。儀器預(yù)熱20分鐘。
    4．打開(kāi)試樣室蓋（光門自動(dòng)關(guān)閉），調(diào)節(jié)“0”旋鈕，使數(shù)字顯示為“00.0”，蓋上試樣室蓋，將比色皿架置與蒸餾水校正位置，使光電管受光，調(diào)節(jié)透過(guò)率“100%”旋鈕，使數(shù)字顯示為“100.0”。
    5．如果顯示不到“100.0”，則可適當(dāng)增加微電流放大器的倍率檔數(shù)，但盡可能置低倍率檔使用，這樣儀器將有更高的穩(wěn)定性。但改變倍率后必須按(4)重新校正“0”和“100%”。
    6．預(yù)熱后，按(4)連續(xù)幾次調(diào)整“0”和“100%”，儀器即可進(jìn)行測(cè)定工作。     7．吸光度A的測(cè)量按(4)調(diào)整儀器的“00.0”和“100%”，將選擇開(kāi)關(guān)置于“A”，調(diào)節(jié)吸光度調(diào)零旋鈕，使得數(shù)字顯示為“.000”，然后將被測(cè)樣品移入光路，顯示值即為被測(cè)樣品的吸光度值。
    8．濃度C的測(cè)量：選擇開(kāi)關(guān)由“A”旋置“C”，將已標(biāo)定濃度的樣品放入光路，調(diào)節(jié)濃度旋鈕，使得數(shù)字顯示為標(biāo)定值，將被測(cè)樣品放入光路，即可讀出被測(cè)樣品的濃度值。
    9．如果大幅度改變測(cè)試波長(zhǎng)時(shí)，在調(diào)整“0”和“100%”后稍等片刻，（因光能量變化急劇，光電管受光后響應(yīng)緩慢，需一段光響應(yīng)平衡時(shí)間），當(dāng)穩(wěn)定后，重新調(diào)整“0”和“100%”即可工作。
    10．每臺(tái)儀器所配套的比色皿，不能與其它儀器上的比色皿單個(gè)調(diào)換。     11．本儀器數(shù)字表后蓋，有信號(hào)輸出0～1000MV，插座1腳為正，2腳為負(fù)接地線。
    吸收池（即比色杯）使用注意事項(xiàng)：

② 嚴(yán)禁用手指觸摸透光面，因指紋不易洗凈。嚴(yán)禁用硬紙和布擦拭透光面，只能使用鏡頭紙和綢布。
    ③ 嚴(yán)禁加熱烘烤。急用干的杯子時(shí)，可用酒精蕩洗后用冷風(fēng)吹干。決不可用超聲波清洗器清洗。
    ④ 吸收池的校正：要固定參比杯和樣品杯，可在杯的毛玻璃面上寫上記號(hào)。用盛有參比液的參比杯和樣品杯測(cè)定吸光度“A0”，樣品杯換上樣品液后測(cè)定的吸光度為“A1”，則校正后的實(shí)際吸光度A為：A= A1－A0 1. 分光光度法定義與應(yīng)用 
1.1 定義: 分光光度法是利用物質(zhì)所*的吸收光譜來(lái)鑒別物質(zhì)或測(cè)定其含量的分析檢測(cè)技術(shù). 
    1.2 特點(diǎn): 靈敏, ,快速和簡(jiǎn)便,在復(fù)雜組分系統(tǒng)中,不需要分離,即能檢測(cè)出其中所含的極少量物質(zhì). 
    1.3 應(yīng)用: 生物化學(xué)研究中廣泛使用的方法之一,廣泛用于糖,蛋白質(zhì),核酸,酶等的快速定量檢測(cè).  
2. 分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)和工作原理      2.1 分光光度計(jì)的分類      分光光度計(jì)的分類 
    紅外分光光度計(jì): 測(cè)定波長(zhǎng)范圍為大于760 nm的紅外光區(qū)      可見(jiàn)光分光光度計(jì): 測(cè)定波長(zhǎng)范圍為400~760 nm的可見(jiàn)光區(qū)      紫外分光光度計(jì): 測(cè)定波長(zhǎng)范圍為200～400 nm的紫外光區(qū)      2.2 分光光度計(jì)工作原理 
    人眼可見(jiàn)的光只占電磁波譜的很小—部分(400~760nm)，它是一種頻率較大的電磁波.電磁波按頻率大小,從頻率zui小的無(wú)線電波到頻率zui大的γ-射線排成一列,即組成電磁波的波譜,如下圖所示.       2.2.1 分光光度計(jì)的光譜范圍 
    包括波長(zhǎng)范圍為400~760 nm的可見(jiàn)光區(qū)和波長(zhǎng)范圍為200～400 nm的紫外光區(qū).不同的光源都有其*的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源. 
    鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的400～760nm波長(zhǎng)的光譜,光通過(guò)三棱鏡折射后,可得到由紅,橙,黃,綠,藍(lán),靛,紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見(jiàn)光分光光度計(jì)的光源. 
    氫燈的發(fā)射光譜:氫燈能發(fā)出185～400 nm波長(zhǎng)的光譜,可作為紫外光光度計(jì)的光源. 
    2.2.2 物質(zhì)的吸收光譜(1)